细胞培养操作规程:
一.培养基及培养冻存条件准备:
1) 准备F-12K培养基;胎牛血清,10%;双抗,1%。
2) 培养条件: 气相:空气,95%;二氧化碳,5%。 温度:37℃,培养箱湿度为70%-80%。
3) 冻存液:90%血清,10%DMSO,现用现配。
二. 细胞处理:
1) 复苏细胞:将含有1mL细胞悬液的冻存管迅速放入37℃水浴中(水面要低于冻存管盖部)摇晃解冻,移入事先准备好的含有4mL培养基的15ml离心管中混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟,弃去上清液,加入1mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液移入含有5ml培养基的培养瓶中培养过夜。换液并检查细胞密度。
2) 细胞传代:如果细胞密度达80%-90%,即可进行传代培养。
公司细胞现货供应,质量有保证、价格优惠、实验效果好,我司为您提供免费代测服务,同时提供价格、说明书、规格、用途、实验原理等相关操作说明。
产品名称
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规格
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型号
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大鼠肝星状细胞
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5×10?Cells/T25培养瓶
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GOY-01X0846
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冷冻保存细胞之方法?
冷冻保存方法一: 冷冻管置于4℃ 30~60 分钟→ (-20 ℃30 分钟*) → -80 ℃16~18 小时(或隔夜) → 液氮槽vaporphase 长期储存。
冷冻保存方法二: 冷冻管置于已设定程序之可程序降温机中每分钟降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下, 再放入液氮槽vapor phase长期储存。*-20 ℃不可超过1 小时, 以防止冰晶过大,造成细胞大量死亡,亦可跳过此步骤直接放入-80℃ 冰箱中,惟存活率稍微降低一些。
实验事项:
1. 试剂准备:所有试剂都必须在使用前达到室温,使用后请立即按照说明书要求保存试剂。 实验操作中请使用一次性的吸头,避免交叉污染。
2. 加样:加样或加试剂时,请注意在吸取标本 / 标准品,酶结合物或底物时,前一个孔与后一个孔加样之间的时间间隔如果太大,将会导致不同的“预孵育"时间,从而明显地影响到测量值的准确性及重复性。一次加样时间(包括标准品及所有样品)好控制在10分钟内,如标本数量多,推荐使用多道移液器加样。
3. 孵育:为防止样品蒸发,试验时将反应板放于铺有湿布的密闭盒内,酶标板加上盖或覆膜,以避免液体蒸发;洗板后应尽快进行下步操作,任何时侯都应避免酶标板处于干燥状态;同时应严格遵守给定的孵育时间和温度。
4. 洗涤:洗涤过程中反应孔中残留的洗涤液应在滤纸上充分拍干,勿将滤纸直接放入反应孔中吸水,同时要消除板底残留的液体和手指印,避免影响后的酶标仪读数。
5. 试剂配制:Detection A及Detection B在使用前请手甩几下或少时离心处理,以使管壁或瓶盖的液体沉积到管底。标准品、检测溶液A工作液、检测溶液B工作液请依据所需的量配置使用,并使用相应的稀释液配制,不能混淆。请确配置标准品及工作液,尽量不要微量配置(如吸取检测溶液A时,一次不要小于10μl),以避免由于不准确稀释而造成的浓度误差;请勿重复使用已稀释过的标准品、检测溶液A工作液或检测溶液B工作液。
6. 反应时间的控制:加入底物后请定时观察反应孔的颜色变化(比如,每隔10分钟),如颜色较深,请提前加入终止液终止反应,避免反应过强从而影响酶标仪光密度读数。
7. 底物:底物请避光保存,在储存和温育时避免强光直接照射。
建议检测样品时均设双孔测定,以保证检测结果的准确性。
如标本中待测物质含量过高,请先稀释后再测定,计算时请后乘以稀释倍数。
50mg 酐 ( 牛红血球 ) Carbonic Anhydrase 4℃保存
1000mL SSC,20X SSC,20X 常温保存
1瓶 BaF3细胞株 BaF3 低温运输和保存
2 ug pSilencer 4.1-CMV puro pSilencer 4.1-CMV puro 低温运输,-20℃保存
25次 一站式全血mRNAout One-Stop Blood mRNA Isolation Kit 4℃保存
2 ug pCMV-HA-N pCMV-HA-N 低温运输,-20℃保存
Campy-Cefex添加剂 Campy-Cefex Supplement 2ml*5
10mg 植物血球凝集素 M PHA-M(Phytohemagglutinin M) 4℃保存
50T 人黏附分子ICAM基因PCR检测试剂盒 低温运输,-20℃保存
0.5 g Catechin hydrate(抗氧化剂) Cell Apoptosis Inducer and Inhibitor -20℃保存
50mL EGTA Solution(EGTA溶液),1M,pH7.4 EGTA Solution,1M,pH7.4 常温保存
10L DMEM( 低糖 ) DMEM(Low Glucose) 4℃保存
2 ug pHT43 pHT43 低温运输,-20℃保存
TCH(噻吩-2-羧酸酰肼) 0.1g
大鼠肝星状细胞小鼠17-酮类固醇(17-KS)试剂盒进口、分装
胸苷酸合成(TS)试剂盒进口、分装
大鼠Rho鸟苷酸交换因子7(Arhgef7/Pak3bp/Pixb)试剂盒进口、分装
大鼠肾损伤分子1(Kim-1)试剂盒现货供应
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可溶性血小板内皮细胞粘附分子1(sPECAM-1/sCD31)试剂盒进口、组装
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