细胞培养方法：
1、细胞传代：细胞密度达到80-90%时即可传代
①弃去培养上清，用PBS或生理盐水清洗1-2次；
②加入2ml0.25%胰酶（T25瓶），使胰酶覆盖整个瓶或皿，盖好放入培养箱消化；
③1-2min后，显微镜下观察细胞，若大部分细胞回缩且有少量细胞脱落，轻轻吹打下确认消化情况后加入完全培养基终止消化；若细胞还是贴壁，放回培养箱继续消化至可以轻轻吹打下为止；
④将细胞悬液1000RPM左右条件下离心4min，弃上清；
⑤用新鲜培养基重悬后加入培养瓶或皿中，T25培养瓶加6-8ml培养基；
⑥悬浮细胞直接离心收集，细胞沉淀重悬后分到新培养瓶中。
2、细胞复苏：
①将冻存管在37℃温水中快速摇晃融化，时间1min左右，加入4-5ml培养基混匀。
②在1000RPM左右条件下离心4min，弃上清,加1-2ml培养基吹匀，将细胞悬液加入培养瓶中，补加适量培养基。
3、细胞冻存：待细胞生长状态良好时进行细胞冻存保种
①弃去培养上清，用PBS或生理盐水清洗1-2次，加入1mL 0.25%胰蛋白酶（T25瓶）
②1-2min后，显微镜下观察细胞，大部分细胞回缩且有少量细胞脱落，轻轻吹打下确认消化情况后加入完全培养基终止消化；
③将细胞悬液1000RPM左右条件下离心4min，弃上清，加1ml冻存液重悬细胞；
④将冻存管放入程序降温盒，放入-80℃冰箱，4小时后将冻存管转入液氮罐储存。
下列是产品的订购信息：
|
产品名称
|
规格
|
型号
|
|
小鼠肺大静脉平滑肌细胞
|
5×10?Cells/T25培养瓶
|
GOY-01X0721
|
细胞培养的优点：
1.研究的对象是活细胞
在实验过程中，根据要求可始终保持细胞活力，并可长时间监控、检测甚至定量评估一部分活细胞的情况，包括活细胞的形态、结构、生命活动等。
2.研究条件可以人为控制
pH、温度、氧气、二氧化碳、张力等物理化学的条件，可以根据实际需要进行人为的控制，同时，可以施加化学、物理、生物等因素作为条件而进行实验观察，这些因素同样可以处于严格控制之下。
3.研究的样本可以达到比较均一性
通过细胞培养一定代数后，所得到的细胞系则可以达到均一性而属于同一类型的细胞，需要时，可采用克隆化等方法使细胞达到纯化。
4.研究内容便于观察、检测和记录
采用各种研究技术：如倒置生物显微镜、荧光显微镜、电子显微镜、流式细胞术、激光共焦显微镜、组织化学、原位杂交、同位素标记等各种仪器设备。
培养操作：
1）复苏细胞：将含有 1mL 细胞悬液的冻存管在 37℃水浴中迅速摇晃解冻，加 入 4mL 培养基混合均 匀。在 1000RPM 条件下离心 4 分钟，弃去上清液，补 加 1-2mL 培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培 养过夜（或将 细胞悬液加入 10cm 皿中，加入约 8ml 培养基，培养过夜）?；灰翰?检查细胞密度。
2）细胞传代：如果细胞密度达 80%-90%，即可进行传代培养。
1. 弃去培养上清，用不含钙、镁离子的 PBS 润洗细胞 1-2 次。
2. 加 1ml 消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，置于 37℃培 养箱中消化 1-2 分钟，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分 变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养 瓶后加少量培养基终止消 化。
3. 按 6-8ml/瓶补加培养基，轻轻打匀后吸出，在 1000RPM 条件下离心 4 分 钟，弃去上清液，补加 1-2mL 培养液后吹匀。
4. 将细胞悬液按 1：2 比例分到新的含 8ml 培养基的新皿中或者瓶中。
3）细胞冻存：待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。下面 T25 瓶为类；
1. 细胞冻存时，弃去培养基后，PBS 清洗一遍后加入 1ml 胰酶，细胞变圆 脱 落后，加入 1ml 含血清的培养基终止消化，可使用血球计数板计数。
2. 4 min 1000rpm 离心去掉上清。加 1ml 血清重悬细胞，根据细胞数量加 入血 清和 DMSO，轻轻混匀，DMSO 终浓度为 10%，细胞密度不低于1x106/ml，每支冻存管冻存 1ml 细胞悬液，注意冻 存管做好标识。
3. 将冻存管置于程序降温盒中，放入-80 度冰箱，2 个小时以后转入液氮灌储存。记录冻存管位置以便下次拿取。
2 ug pSilencer adeno 1.0-CMV pSilencer adeno 1.0-CMV 低温运输，-20℃保存
50次 一站式磁珠法植物mRNAout
2 ug pCMV-Myc pCMV-Myc 低温运输，-20℃保存
Mueller-Hinton琼脂（MHA） Mueller-Hinton Agar 250g
5g 红 Phenol Red 室温保存
50T 人瘤病毒16,18型PCR检测试剂盒 低温运输，-20℃保存
1瓶 SUP-B15细胞株 SUP-B15 低温运输和保存
50mL Cobalt Chloride Solution（氯化钴溶液）,0.5M Cobalt Chloride Solution,0.5M 常温保存
25uL Fluorescein -12- dUTP溶液 (1mM) Fluorescein -12- dUTP Solution -20℃避光保存
2 ug pIC111 pIC111 低温运输，-20℃保存
指示选择性培养基基础 Direct selective medium-based 250g
1瓶 JeKo-1细胞株 JeKo-1 低温运输和保存
2.5L微需氧产气包 10个/包
1000μg RecA蛋白 RecA -20℃保存
小鼠肺大静脉平滑肌细胞汞元素检测样品处理试剂盒 20次
聚丙烯酰胺凝胶粉碎法胶回收试剂盒 20次
动物组织高纯内质网分离试剂盒 10次
组蛋白H3-K18乙?；觳馐约梁?10/20次等
血液硫代酸反应物（TBARS）比色法定量检测试剂盒 20次
食物直链淀粉比色法定量检测试剂盒 20次
植物赖氨酸（lysine）含量化学比色法定量检测试剂盒 20次
石蜡切片组织ANDROGEN RECEPTOR 蛋白表达NBT显色光学显微镜检测试剂盒 10/20次
总微型RNA（miRNA）超滤法分离试剂盒 10次
组织硫氰酸酶（rhodanase）活性比色法定量检测试剂盒 20次
细胞衰老特异性脂褐素尼罗篮原位染色试剂盒 50次
细胞可溶性总核蛋白制备试剂盒 20次