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冷冻保存细胞之方法？
冷冻保存方法一: 冷冻管置于4℃ 30~60 分钟→ （-20 ℃30 分钟*） → -80 ℃16~18 小时（或隔夜） → 液氮槽vaporphase 长期储存。
冷冻保存方法二: 冷冻管置于已设定程序之可程序降温机中每分钟降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下， 再放入液氮槽vapor phase长期储存。*-20 ℃不可超过1 小时， 以防止冰晶过大，造成细胞大量死亡，亦可跳过此步骤直接放入-80℃ 冰箱中，惟存活率稍微降低一些。

细胞培养操作规程：

一．培养基及培养冻存条件准备：

1） 准备F-12K培养基；胎牛血清，10%；双抗，1%。

2） 培养条件： 气相：空气，95%；二氧化碳，5%。 温度：37℃，培养箱湿度为70%-80%。

3） 冻存液：90%血清，10%DMSO，现用现配。

二． 细胞处理：

1） 复苏细胞：将含有1mL细胞悬液的冻存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于冻存管盖部）摇晃解冻，移入事先准备好的含有4mL培养基的15ml离心管中混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，加入1mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液移入含有5ml培养基的培养瓶中培养过夜?；灰翰⒓觳橄赴芏?。

2） 细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。

实验事项：

1. 试剂准备：所有试剂都必须在使用前达到室温，使用后请立即按照说明书要求保存试剂。  实验操作中请使用一次性的吸头，避免交叉污染。

2.   加样：加样或加试剂时，请注意在吸取标本 / 标准品，酶结合物或底物时，前一个孔与后一个孔加样之间的时间间隔如果太大，将会导致不同的“预孵育"时间，从而明显地影响到测量值的准确性及重复性。一次加样时间(包括标准品及所有样品)好控制在10分钟内，如标本数量多，推荐使用多道移液器加样。

3.   孵育：为防止样品蒸发，试验时将反应板放于铺有湿布的密闭盒内，酶标板加上盖或覆膜，以避免液体蒸发；洗板后应尽快进行下步操作，任何时侯都应避免酶标板处于干燥状态;同时应严格遵守给定的孵育时间和温度。

4.   洗涤：洗涤过程中反应孔中残留的洗涤液应在滤纸上充分拍干，勿将滤纸直接放入反应孔中吸水，同时要消除板底残留的液体和手指印，避免影响后的酶标仪读数。

5.  试剂配制：Detection A及Detection B在使用前请手甩几下或少时离心处理，以使管壁或瓶盖的液体沉积到管底。标准品、检测溶液A工作液、检测溶液B工作液请依据所需的量配置使用，并使用相应的稀释液配制，不能混淆。请确配置标准品及工作液，尽量不要微量配置(如吸取检测溶液A时，一次不要小于10μl)，以避免由于不准确稀释而造成的浓度误差；请勿重复使用已稀释过的标准品、检测溶液A工作液或检测溶液B工作液。

6.  反应时间的控制：加入底物后请定时观察反应孔的颜色变化(比如，每隔10分钟)，如颜色较深，请提前加入终止液终止反应，避免反应过强从而影响酶标仪光密度读数。

7.  底物：底物请避光保存，在储存和温育时避免强光直接照射。

 建议检测样品时均设双孔测定，以保证检测结果的准确性。

 如标本中待测物质含量过高，请先稀释后再测定，计算时请后乘以稀释倍数。

1瓶 C918细胞株 C918 低温运输和保存

大肠杆菌／大肠菌群显色培养基(平皿)  9CM平皿

100U Vent DNA 聚合 Vent (exo-)DNA Polymerase -20℃保存

500mL Phosphate Buffer，0.2M, pH7.0   Phosphate Buffer，0.2M, pH7.0   常温保存

0.1mL×10 Origami (DE3)感受态细胞 Origami (DE3) Competent Cell -80℃保存

2 ug pOTB7 STX1A pOTB7 STX1A 低温运输，-20℃保存

B5培养基（不含琼脂） B5 Medium 250g

1瓶 U-2 OS细胞株 U-2 OS 低温运输和保存

煌绿黄胺琼脂 Brilliant Green Agar w/Sulfadiazine 250g

100g 酸性品红 Fuchsin Acid    室温保存

50T 汉坦病毒Ⅱ型PCR检测试剂盒  低温运输，-20℃保存

30μL α-Tubulin小鼠单抗 α-Tubulin Mouse MAb -20℃保存

2 ug pBI 101 pBI 101 低温运输，-20℃保存

2mL 环氧基磁珠 Magnetic beads,Epoxy 4℃密闭、竖直保存

鸡前脂肪细胞基因检测试剂盒

M. scrofulaceum RFLP基因分析试剂盒 20次

人体RUNX3基因重组表达载体（pCMV5－RUNX3）1毫升

营养补充剂L-天门冬酰胺酶偶联反应比色法定量检测试剂盒 20次

细胞II型L－3羟酰基－CoA 脱氢酶/β淀粉样蛋白结合乙醇脱氢酶（HADHII/ABAD）活性比色法定量检测试剂盒 20次

基因检测试剂盒

真/酵母细胞内氧化应激活性氧（ROS）红色荧光测定试剂盒 20次

植物亮氨酸（leucine）含量比色法定量检测试剂盒 20次

组织铜离子浓度比色法定量检测试剂盒 20次

高效液相色谱法（HPLC）定量检测试剂盒

TNF ALPHA蛋白表达ELISA定量检测试剂盒 25次

通用型vero大肠杆志贺氏-1（VTEC - Shigatoxin 1）20次

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