使用方法:
一、样品 DNA 的制备
用自选方法提取 Cps DNA。注意：DNA 纯化方法是决定检测灵敏度的关键因素。如果不能很好纯化样品 DNA，后面的 PCR 再灵敏也不能提高整体检测灵敏度。
二、制备 Cps 标准曲线（以 10-10E6 这 6 个 10 倍稀释度为例。由于标准品浓度非常高，因此下列稀释操作一定要在独立的区域进行，千万不能污染样品或本试剂盒的其他成分）。为增加产品稳定性和避免扩散传染性病原，本产品不提供活体病毒做阳性对照，只提供没有传染性的、可以直接使用的 DN**段作为阳性对照。
1. 标记 6 个离心管，分别为 6，5，4，3，2 和 1 号。
2. 用带芯枪头分别加入 45 μL 超纯水。
3. 先将本试剂盒提供的阳性对照用 TE 缓冲液或超纯水 10 倍梯度稀释到10E7 拷贝/μL（注：请不要将本试剂盒提供的标准品一次性稀释至 10E7拷贝/μL，建议每次稀释 10 倍，梯度稀释至 10E7 拷贝/μL）。
4. 在 6 号管中加入 5 μL 10E7 拷贝/μL 的 Cps 阳性对照(上步稀释所得)，充分震荡 1 分钟，得 10E6 拷贝/μL 的阳性对照。
5. 换枪头，从 6 号管中取 5 μL 溶液到 5 号管中，充分震荡 1 分钟，得 10E5拷贝/μL 的阳性对照。
6. 换枪头，从 5 号管中取 5 μL 溶液到 4 号管中，重复上面的操作直到得到 6个稀释度的阳性对照。
7. NC 管中不加任何阳性对照。
8. 从 1-6 号管中分别取 5 μL 和待测样品一起进行定量 PCR（见下步），每个样品做 3 次重复。PCR 后得到每个阳性对照稀释样品的荧光 PCR Ct 值，并以之为纵轴，以浓度的对数值为横轴，绘制标准曲线。
服务流程：
接受订单及样品——RNA提取——RNA质量检测——样品cDNA合成——定量试验——数据分析——结果交付——售后服务。
|
产品名称
|
规格
|
货号
|
|
汉坦病型PCR检测试剂盒
|
50T
|
GOY-M0503
|
特点：
1. 即开即用，用户只需要提供病毒样品。
2. 根据鲍疱疹样病毒保守序列设计的专一性引物，与相关病毒无交叉反应。
3. 灵敏度可以达到几百拷贝/反应。
4. 一管式荧光定量 PCR 检测，避免后续污染。
5. 本试剂盒足够 50 次 20μL 反应体系的荧光定量 PCR。
6. 本产品只适用于科研，不能用于临床诊断。
组成及试剂配制:
1、酶标板：一块（96孔）
2、 标准品（冻干品）： 2瓶，请临用前15分钟内配制。每瓶以样品稀释液稀释至0.5ml，盖好后室温静置大约10分钟，同时反复颠倒/搓动以助溶解，其浓度为200 U/L，然后做系列倍比稀释（注：不要直接在板中进行倍比稀释），分别配制成200 U/L，100 U/L，50 U/L，25 U/L，12.5 U/L，6.25 U/L，3.12 U/L，样品稀释液直接作为空白孔 0 U/L。如配制100 U/L标准品：取0.3ml （不要少于0.3ml ）200 U/L的上述标准品加入含有0.3ml样品稀释液的Eppendorf管中，混匀即可，其余浓度以此类推。
3、 样品稀释液：1×20ml。
4、 检测稀释液A：1×10ml。
5、 检测稀释液B：1×10ml。
实验方法步骤：
方法
1：在冰浴中，按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。
10×PCR buffer
5 μl dNTP mix （2mM）
4 μl 引物1（10pM）
2 μl 引物2（10pM）
2 μl Taq酶 （2U/μl）
1 μl DNA模板（50ng-1μg/μl）
1 μl 加ddH2O至 50 μl
视PCR仪有无热盖，不加或添加石蜡油。
2：调整好反应程序。将上述混合液稍加离心，立即置PCR仪上，执行扩增。一般：在93℃预变性3-5min，进入循环扩增阶段：93℃ 40s →58℃ 30s → 72℃ 60s，循环30-35次，在72℃ 保温7min。
牛心浸粉 英文名称：Beef Heart Infusion 产品规格：100g
肝浸粉 英文名称：Liver Infusion 产品规格：100g
牛胆盐 英文名称：Bile Salt 产品规格：100g
酸水解酪蛋白 英文名称：Casein acid Hydrolysate 产品规格：250g
多价蛋白胨 英文名称：Polypeptone 产品规格：250g
特殊蛋白胨 英文名称：Peptone Special 产品规格：250g
去氧胆酸钠 英文名称：Desoxycholate Salt 产品规格：100g
酵母浸粉 英文名称：Yeast Extract Powder 产品规格：250g
猪胃消化粉 英文名称： 产品规格：250g
猪胆粉 英文名称： 产品规格：250g
酵母浸粉（进口） 英文名称：Yeast Extract Powder 产品规格：250g
麦芽浸粉 英文名称： 产品规格：200g
汉坦病型PCR检测试剂盒人分泌型球蛋白A 规格： 0.1ml 英文名称： human secretory IgA
白介素6抗体 规格： 0.1ml 英文名称： IL-6
整合素β7抗体 规格： 0.1ml 英文名称： Integrin beta 7
白细胞介素31抗体 规格： 0.2ml 英文名称： IL-31
连接蛋白JPH3抗体 规格： 0.2ml 英文名称： Junctophilin 3
白介素2受体γ链抗体 规格： 0.1ml 英文名称： IL-2R gamma
电压门控性钾通道Kv2.2抗体 规格： 0.2ml 英文名称： Kv2.2
ATP敏感性钾通道亚基kir6.2抗体 规格： 0.1ml 英文名称： Kir6.2
细胞角膜蛋白多糖抗体 规格： 0.1ml 英文名称： Keratocan
项韧带弹性蛋白抗体 规格： 0.1ml 英文名称： Elastin
晚期包膜蛋白2B抗体 规格： 0.2ml 英文名称： LCE2B