使用方法:
一、样品 DNA 的制备
用自选方法提取 Cps DNA。注意:DNA 纯化方法是决定检测灵敏度的关键因素。如果不能很好纯化样品 DNA,后面的 PCR 再灵敏也不能提高整体检测灵敏度。
二、制备 Cps 标准曲线(以 10-10E6 这 6 个 10 倍稀释度为例。由于标准品浓度非常高,因此下列稀释操作一定要在独立的区域进行,千万不能污染样品或本试剂盒的其他成分)。为增加产品稳定性和避免扩散传染性病原,本产品不提供活体病毒做阳性对照,只提供没有传染性的、可以直接使用的 DN**段作为阳性对照。
1. 标记 6 个离心管,分别为 6,5,4,3,2 和 1 号。
2. 用带芯枪头分别加入 45 μL 超纯水。
3. 先将本试剂盒提供的阳性对照用 TE 缓冲液或超纯水 10 倍梯度稀释到10E7 拷贝/μL(注:请不要将本试剂盒提供的标准品一次性稀释至 10E7拷贝/μL,建议每次稀释 10 倍,梯度稀释至 10E7 拷贝/μL)。
4. 在 6 号管中加入 5 μL 10E7 拷贝/μL 的 Cps 阳性对照(上步稀释所得),充分震荡 1 分钟,得 10E6 拷贝/μL 的阳性对照。
5. 换枪头,从 6 号管中取 5 μL 溶液到 5 号管中,充分震荡 1 分钟,得 10E5拷贝/μL 的阳性对照。
6. 换枪头,从 5 号管中取 5 μL 溶液到 4 号管中,重复上面的操作直到得到 6个稀释度的阳性对照。
7. NC 管中不加任何阳性对照。
8. 从 1-6 号管中分别取 5 μL 和待测样品一起进行定量 PCR(见下步),每个样品做 3 次重复。PCR 后得到每个阳性对照稀释样品的荧光 PCR Ct 值,并以之为纵轴,以浓度的对数值为横轴,绘制标准曲线。
服务流程:
接受订单及样品——RNA提取——RNA质量检测——样品cDNA合成——定量试验——数据分析——结果交付——售后服务。
特点:
1. 即开即用,用户只需要提供病毒样品。
2. 根据鲍疱疹样病毒保守序列设计的专一性引物,与相关病毒无交叉反应。
3. 灵敏度可以达到几百拷贝/反应。
4. 一管式荧光定量 PCR 检测,避免后续污染。
5. 本试剂盒足够 50 次 20μL 反应体系的荧光定量 PCR。
6. 本产品只适用于科研,不能用于临床诊断。
组成及试剂配制:
1、酶标板:一块(96孔)
2、 标准品(冻干品): 2瓶,请临用前15分钟内配制。每瓶以样品稀释液稀释至0.5ml,盖好后室温静置大约10分钟,同时反复颠倒/搓动以助溶解,其浓度为200 U/L,然后做系列倍比稀释(注:不要直接在板中进行倍比稀释),分别配制成200 U/L,100 U/L,50 U/L,25 U/L,12.5 U/L,6.25 U/L,3.12 U/L,样品稀释液直接作为空白孔 0 U/L。如配制100 U/L标准品:取0.3ml (不要少于0.3ml )200 U/L的上述标准品加入含有0.3ml样品稀释液的Eppendorf管中,混匀即可,其余浓度以此类推。
3、 样品稀释液:1×20ml。
4、 检测稀释液A:1×10ml。
5、 检测稀释液B:1×10ml。
实验方法步骤:
方法
1:在冰浴中,按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。
10×PCR buffer
5 μl dNTP mix (2mM)
4 μl 引物1(10pM)
2 μl 引物2(10pM)
2 μl Taq酶 (2U/μl)
1 μl DNA模板(50ng-1μg/μl)
1 μl 加ddH2O至 50 μl
视PCR仪有无热盖,不加或添加石蜡油。
2:调整好反应程序。将上述混合液稍加离心,立即置PCR仪上,执行扩增。一般:在93℃预变性3-5min,进入循环扩增阶段:93℃ 40s →58℃ 30s → 72℃ 60s,循环30-35次,在72℃ 保温7min。
Astragaline 紫云英苷480-10-420mg人载脂蛋白C2(Apo-C2)ELISA试剂盒 96T/48T 试剂盒 组装/原装
Benzoic acid 苯甲酸65-85-0250mg大鼠促甲状腺素释放**(TRH)ELISA 试剂盒 96T/48T 试剂盒 组装/原装
0.5M EDTA (PH8.0)100ml瓶人甲状腺非肽**抗体(THAA)ELISA 试剂盒 96T/48T 试剂盒 组装/原装
L-Arginine L-精氨酸74-79-3200mg小鼠抗核膜糖蛋白210抗体(gp210)ELISA 试剂盒 96T/48T 试剂盒 组装/原装
固相RNase**剂250ml瓶鸡催乳素(PRL)ELISA 试剂盒 96T/48T 试剂盒 组装/原装
Griffonilide 格列风内酯61371-55-920mg人细胞毒性T**细胞相关抗原4(CTLA-4/CD152)ELISA 试剂盒 96T/48T 试剂盒 组装/原装
猪外周血**细胞分离液试剂盒200ml/KIT盒
L-α-Lecithin 蛋黄卵磷脂10g瓶人低密度脂蛋白受体相关蛋白6(LRP-6)ELISA 试剂盒 96T/48T 试剂盒 组装/原装
Praeruptorin A 白花前胡甲素73069-25-720mg小鼠白介素15(IL-15)ELISA 试剂盒 96T/48T 试剂盒 组装/原装
D-Sorbitol D-山梨醇250g瓶大鼠血管内皮细胞生长因子(VEGF)ELISA 试剂盒 96T/48T 试剂盒 组装/原装
(直径)25mm有机滤器0.45um个人前列腺特异膜抗原(PSMA)ELISA 试剂盒 96T/48T 试剂盒 组装/原装
Tanshinone IIA-sulfonic sodium 丹参酮IIA-磺酸钠69659-80-920mg植物酸甲酯(MeJA)ELISA 试剂盒 96T/48T 试剂盒 组装/原装
加州立克次体PCR检测试剂盒胰高血糖素样肽-1受体/GLP-1受体抗体 规格: 0.1ml 英文名称: GLP-1R
磷酸化肌动蛋白结合蛋白Girdin抗体 规格: 0.2ml 英文名称: phospho-Girdin (Tyr1765)
GTP酶IMAP家族成员8抗体 规格: 0.2ml 英文名称: GIMAP8
G氨基丁酸受体pi/GABAA Rπ抗体 规格: 0.2ml 英文名称: GABA A receptor pi
巨轴索神经病蛋白GAN抗体 规格: 0.2ml 英文名称: Gigaxonin
磷酸半乳糖尿苷酸转移酶1抗体 规格: 0.2ml 英文名称: GALT
兔抗γ1氨基丁酸抗体 规格: 0.2ml 英文名称: GABA
热休克蛋白-60抗体 规格: 0.1ml 英文名称: HSP60
磷酸化HER4抗体 规格: 0.1ml 英文名称: Phospho-HER4 (Tyr1162)
硫酸肝素糖蛋白1抗体抗体 规格: 0.2ml 英文名称: Syndecan 2/heparin sulphate protoglycans 1
热休克因子1抗体 规格: 0.1ml 英文名称: HSF1