人胚肺二倍体细胞；HL细胞培养操作步骤
发布时间: 2023-09-14
人胚肺二倍体细胞；HL细胞培养操作步骤：（供参考）
吸走多余培养基，加入3-5mL PBS后轻轻晃动培养瓶润洗细胞；
吸干净PBS后加入1mL 0.25%胰-酶-0.53mM EDTA，轻轻摇晃培养皿使胰-酶浸没细胞表面，培养瓶放37度培养箱消化；（细胞对于消化比较敏感，消化过度会严重影响细胞状态，导致细胞传代死亡漂浮或者传代后不长。细胞消化到细胞间隙变大但未脱落，可以轻轻吹下时即可终止，禁止消化到细胞*漂浮?；煸认赴本×壳崛?，不要吹出大量气泡。）
加入6-8ml*培养基终止消化，轻轻吹下细胞混匀；
将混匀的细胞1000rpm（约150g）离心3min，弃上清，再用新鲜培养基重悬37度培养箱继续培养(建议T25瓶加10-12ml*培养基，10cm皿加12-15ml)；传代比例: 不同细胞生长速度不一，具体传代比例视细胞生长速度而定，大部分细胞适用1:3-1:4传代，生长较慢的细胞可以1:2传代。
人胚肺二倍体细胞；HL冷冻保存：
1.冻存液：92%*培养基+8%DMSO（可以根据实验室条件自行选择）
2.降温步骤：4度10min，-20度2h，-80过夜后液氮保存。