夹心酶联**吸附测定（ELISA）抗体包被流程及制备细胞裂解物
发布时间: 2022-12-20
夹心酶联**吸附测定（ELISA）抗体包被流程：
用水漂洗微孔板。每孔加200 μl水然后倒掉。反扣在纸巾上务必将液体吸干。
将捕获抗体按1：100用PBS稀释。为一块96孔板准备10 ml稀释抗体：在9.9 ml PBS中加入100 μl捕获抗体原液。混匀后，每个孔加100 μl。封好后4°C孵育过夜（17-20小时）。
在包被过夜后，轻轻撕去封膜，清洗各孔：
将板中的溶液倒入废液缸中。
用漂洗液洗4次，每次每孔200μl。每次清洗时，将微孔板用力扣在干净纸巾上，弃净所有液体，但注意不要让微孔板完全干掉。
用无尘纸擦拭所有孔的外底面
封闭微孔板。每个孔中加入150 μl封闭液，盖好板后37°C孵育2小时。
封闭后，按步骤3洗板。洗好后微孔板就可以用了。
制备细胞裂解物
吸去培养基。换上添加有调节因子的新鲜培养基，处理所需时间。
在非变性条件下收集细胞，去除培养基并用冰冷的PBS漂洗一遍。
除去PBS，每个10 cm盘中加入0.5 ml冰冷的含1 mM PMSF的1X细胞裂解液，冰上放置5分钟。
将所有细胞刮下，转移至合适的离心管中。继续放在冰上。
在冰上对样品进行超声处理。
4°C离心10分钟，将上清转移到一个新管中。上清即为细胞裂解物。分装成足够一次使用的若干份保存在–80°C。